间接法胶体金试纸条或间接法ELISA会出现钩状效应吗?间接法出现钩状效应的原因是什么?

间接法胶体金试纸条或间接法ELISA会出现钩状效应吗?间接法出现钩状效应的原因是什么?

内容源于公众:检验知识解读(圆n)

HOOK效应:在一定的浓度范围内,分析物的浓度与检测信号值呈正比;但是,当超过某一浓度界限后,信号值反而随着浓度的增高而下降的现象。因为浓度与信号值的整条曲线形似钩子,所以称作钩状效应,其中抗体过量叫做前带效应;抗原过量叫做后带效应。

当抗原抗体出现HOOK时经常会超出检测限而不能准确定量的检测出相关的数值,只有抗原抗体比例合适时才出现最强的反应,在检测限内检测出准确的数值。

抗原或抗体比例不适时会影响抗原抗体结构的完整性,不完整的抗原抗体网络状结构会更容易溶解或更容易被水洗使得高浓度标本低于检测限。

抗原抗体反应:抗原表位与抗体超变区中抗原结合点之间的结合。

1、由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系,所以具有高度的特异性

2、抗原抗体按比例形成免疫复合物

3、抗原抗体反应具有可逆性

1、是反应物自身的因素

抗体:不同的抗体自身的特异性、亲和力不同,为提高试验的可靠性,应选择高特异性、高亲和力的抗体作诊断试剂

抗原:抗原的理化性状、分子量、抗原决定簇的种类及数目均可影响反应结果。颗粒性抗原出现凝集反应,可溶性抗原出现沉淀反应,单价抗原与相应抗体结合不出现沉淀现象。

2、反应环境条件

(1)电解质:适当浓度的电解质会使他们失去一部分负电荷而相互结合,出现肉眼可见的凝集或沉淀现象,为了促成沉淀物或凝集物的形成,常用0.85%NaCl或各种缓冲液作为抗原及抗体的稀释液。

(2)酸碱度:pH过高或过低都将影响抗原、抗体的理化性质,当pH达到或接近颗粒性抗原的等电点时,即使没有相应抗体存在时,也会引起抗原非特异性凝集,即自凝,造成假阳性反应,严重影响试验的可靠性。

(3)温度:在一定范围内,温度升高可加速分子运动,抗原与抗体碰撞机会增多,使反应加速。每种试验都有其独特的最适反应温度要求。此外,适当振荡也可促进抗原抗体分子的接触,加速反应。

1、稀释法测定

2、尽量选择二步法

3、反正中充分混匀震荡

对于免疫项目的检测,基本的方法学原理是抗原抗体的反应,抗原抗体的一步法反应容易出现钩状效应,但一般在分子量非常大的一毕竟容易出现钩状效应,不同的产品需要侧重的点也一定不一样,如超敏肌钙蛋白肯定要侧重低端灵敏度如乙肝患者的乙肝表面抗原可高达数万pg/ml、葡萄胎的孕妇体内的AFP、HCG也比较容易产生钩状效应,但是像糖类抗原CA199,CA125,CA724等因为体内产生的量相对毕竟少,一般含量都在检测限范围内,所以ELISA、化学发光、金标条等都会出现钩状效应,但是分子量小的比较不容易出现钩状效应。

罗氏诊断电化学发光项目的夹心法本质上都是一步法。

对于梅毒的非特异性反应TRUST也会出现钩状效应,如原倍TRUST试验结果是弱阳性,稀释倍数1:2的结果是阳性。

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