T载体是专为聚合酶链反应（PCR）产物设计的线性化克隆载体，其核心特征在于两侧3′端各含有一个突出的脱氧胸苷酸（T）结构。该载体通过T-A碱基互补配对原理，与PCR产物末端天然形成的腺苷酸（A）尾部高效连接，形成重组质粒 。与传统克隆技术相比，T载体无需依赖限制性内切酶切割，显著简化操作流程并提升连接效率达50倍。
TA克隆技术利用T4 DNA连接酶催化磷酸二酯键形成，属于非定向克隆，PCR产物两端均为A尾，与T载体连接时存在约50%的反向克隆概率 。在测序应用中，T载体的通用引物设计可有效规避PCR产物5'端测序盲区，确保目标序列完整获取。截至2025年，商业化产品已发展出可保种型蓝白T载体等创新方案，通过环形质粒储存技术解决传统载体需反复购买的痛点。
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