RACE技术

RACE技术

RACE技术(快速扩增cDNA末端),全称cDNA末端快速扩增技术,是由Frohman等人于1988年提出的基于PCR扩增cDNA末端的分子生物学方法 。该技术通过逆转录PCR从已知部分cDNA序列扩增未知末端区域,用于获取完整5'和3'端序列,适用于低丰度转录本分析 。其核心流程包括cDNA合成、末端加尾(如poly(C)或poly(A))及巢式PCR扩增,分为3'RACE和5'RACE两类 。

经典RACE技术经多次改进,包括采用锁定引物合成第一链cDNA、SMARTTM技术结合oligo(dT)引物与通用引物UPM扩增 。商业化试剂盒如CLONTECH公司MarathoTM与SMARTTM RACE通过优化反转录酶(如RNase H-莫洛尼氏鼠白血病毒反转录酶)和热启动PCR增强特异性 。3'RACE系统利用mRNA自身poly(A)尾设计锚定引物,而5'RACE系统通过末端脱氧核苷酸转移酶加尾扩增 。该技术广泛应用于克隆全长cDNA、构建cDNA文库及验证miRNA靶基因序列 。

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