正负筛选法是基因打靶技术中通过正负选择标记筛选同源重组体的方法，由Mansour于1988年提出 。其核心载体在同源序列中插入新霉素抗性基因（Neor）作为正选择标记，并在同源区外端连接单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶基因（HSV-tk）作为负选择标记 。
该方法实施时需构建含正负标记基因的重组载体，通过电穿孔或显微注射导入胚胎干细胞。筛选过程采用G418抗性作为正选择条件，丙氧鸟苷敏感性作为负选择条件：同源重组细胞因仅保留Neor基因而存活，随机整合细胞因同时携带HSV-tk基因被丙氧鸟苷杀死 。该技术现为构建基因敲除动物模型的关键步骤之一 。
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